Методи за изолиране на polyribosomes. Размери polyribosomes синтезират антитела

В момента, за да маркирате polyribosomes от лимфоидни тумори тъкан и миеломни обикновено използват им хомогенизиране в Трие буфер разтвори (рН 7.0-7.6), съдържащ захароза, калиев хлорид (или по-малко - NaCl), MgCl2 (или магнезиев ацетат) и всеки от RNase инхибитор (по-често - хепарин). Предпоставка е използването на реагенти, които не съдържат RNase. Първо отстранява от ядро ​​хомогенат и митохондриите postmitochondrial супернатанта се добавя към всеки от препарат (натриев деоксихолат или Triton Х-100) се разтваря enodoplazmaticheskogo ретикулум мембрана и се утаява polirobosomy (или фракционирано) в етап (0,5-1,5 М) или линейна (обикновено 15-30% разтвор) захарозни градиенти. Добив poliribosomnogo материал в този случай е 30-50% от всички клетъчни рибозоми.

Степента на Рождество Христово polyribosomes, получени от различни източници влияят на концентрацията на захароза, йонна сила и рН на съотношението на буферен разтвор се използва K / Mg и естеството на детергента. Така polyribosomes от далак предпочитане да се използва Triton Х-100, както и в присъствието на натриев деоксихолат отбележи за тяхното разграждане. В някои случаи се препоръчва прибавяне на малки количества SaS12 или спермидин повишаване на стабилността на клетъчните ядра (Goryunova и сътр., 1974- стена напр. A., 1977), и 2-меркаптоетанол (Schechter, 1973). За да се намали времето за контакт на polyribosomes от клетъчен лизат може да се прилага директно към клетки, съдържащи детергент инхибитор ламиниран директно на захарозен градиент. В този случай, по време на центрофугиране kletkp едновременно лизират и фракционира (Davis напр. A., 1969).

Трябва да се отбележи, че изолацията на родния polyribosomes клетки от лимфоидни тъкани от нормални или имунизираното животно тъкан е много по-сложна и по-слабо развита процедура от отделянето им от плазмоцитоми. Може би това се дължи на факта, че има плазмоцитом ендогенен RNase инхибитор, докато в възли на далака и лимфните, не е, и RNase активност при имунизация дори се увеличава.

съществен роля, очевидно играе един вид животно. Най-благоприятни обекти, ред данни са от далак и лимфни възли на плъх, от които е възможно да се получи нативни polyribosomes, се утаява в 250-350S и 160-190S съдържащ активното импулс и маркер аминокиселина (Vassalli, 1967 Vasil и сътр., 1969). Също така има съобщения за разпределяне на нативни polyribosomes от далака на зайци (Becker, богат, 1966- Scharff, Uhr, 1965) и морски свинчета (Николаева, 1976). Тъй туморни тъкани богатият източник на polyribosomes са mielomy- лимфоми в по-малко някои от тези органели (Sherr, Uhr, 1971a).

В резултат на подобрения фракциониране техника лимфоидни тъкани на животни клетки и миши плазмоцитоми успели да изолират голямо разнообразие от polyribosomes с утаяване константи от 118т до 350S. Доказано е, че имунизацията количество polyribosomes и половина до два пъти увеличение (Moav, Harris, 1970- Yurin, 1971), и тяхното специфично разпределение става двуфазна природата. Подобни данни за миеломни клетки са получени от Schubert (Schubert, 1968) и контакт (Сидоров и сътр., 1973).

Предполага се, че разпределението двуфазен polyribosomes, белязано от нарастващите полипептидни вериги отразява присъствието на два класа polyribosomes, участващи в синтеза на Н и L вериги. Имунопреципитация експерименти с polyribosomes антисеруми за Н и L вериги е наистина показват, че Н-веригата открива само на polyribosomes 270-300S и L-верига - за предпочитане polyribosomes 180-190S (Shapiro д, 1966a- Askonas, Williamson, 1967b ). Според изчисленията, извършвани от авторите, тези polyribosomes трябва да съдържа иРНК, състояща се от около 1250 и 500 нуклеотиди, т.е.. Е. Много подходящ за кодиране на синтеза на Н и L вериги.

Получените данни две коренно важни изводи, а именно: 1) Синтез на имуноглобулини е monotsistronnyi природата и 2) размера на polyribosomes и иРНК, участващи в образуването на Н и L вериги, са достатъчни, за да кодира синтезата на всеки от тях като цяло.