Ген аномалия протромбиновото 20210 грама / на

В семействата на пациенти с тромбоза открива автозомно доминантно наследство F2: 20,210 G / А.

В момента, свързани с тази генетична аномалия с свръхпроизводство на протромбин. Все пак, въпреки техническата възможност да се определи повишени нива на протромбин, откриване на заболяването трябва да се основава единствено на PCR данни с висока чувствителност и специфичност на PCR осигури ин витро синтезиран олигонуклеотиди комплементарни на съответната част на протромбиновото човешкия ген.

принцип на метода

За идентифициране на полиморфни алели в F2 генна амплификация, използвайки съответните части на ген чрез PCR с последващо откриване на продуктите на амплификация.

Реактиви и оборудване

• За да се определи аномалии F2: 20,210 G / A се използва следната praymerypraymer 1 (преден праймер) - 5`-TGGGAAATATGGCTTCTACA-3` (нуклеотиди 20035-20054) - грунд 2 (обратен праймер) - 5`-CACTGGGAGCATTGAAGCT-3` (нуклеотиди 20229- 20211).
• Контролните проби с алела от див тип и мутантен алел.
• Thermocycler и друго оборудване за извършване на PCR.

Кръвни проби за изследване за изследвания материал може да бъде всеки източник на ДНК, но по-венозна кръв се използва, които вземат в епруветки, съдържащи EDTA Пробите се съхраняват преди изследването при температура от 2 ... + 8 ° С в продължение на до 24 часа. Пробите се съхраняват Дълги могат да бъдат замразени при -40 ..- 70 ° с

Изолиране на ДНК от клинични проби от материал може да се извърши по различни методи, например чрез използване на базата на силициев диоксид комплекти, определя микроцентрофуга колони комплекти на базата на екстракция с фенол-хлороформ и др.

техниката производителност

Методът се основава на копие избирателните ДНК област многократно използване ин витро ензим. Напредъкът в изследването трябва да отговаря на избраното оборудване и процедурата на PCR анализ (гел електрофореза, светкавицата или др.).

Оценка на резултатите от изследването

Оценка на резултатите се извършва по начин, който позволява да се визуализира олигонуклеотид полиморфна смяна. ДНК фрагменти се определят с помощта на различни флуоресцентни багрила, които специфично се свързват към ДНК.

Тълкуване на резултатите от проучването

За много носители на полиморфизъм характеристика различна локализация тромбоза на, риск, който увеличава значително в присъствие на бременност, използването на орален контрацептив, в постоперативния период и др. Непълен пенетрантност ген, в това отношение, някои носители не имат история на тромботични заболявания. В присъствието на този полиморфизъм вариант хомозиготни възраст на първия епизод е по-малко, както и честотата и тежестта на тромбоза по-горе. хетерозиготно за откриване на честота аномалия, съгласно литературата, е около 1-2% от населението. В присъствието на F2: 20,210 G / A нива при пациенти протромбиновото около 1.5-2 пъти по-високи от нормалното.

Откриване каза аномалия протромбиновото ген при пациенти с рецидивираща тромбоза докаже позволява продължително антикоагулантни профилактика. Такова изследване помага да се идентифицират бременни жени с повишен риск от тромбоза.

Причини за възникване на грешки

• Грешки предварително аналитична фаза на изследването (в нарушение на условията на съхранение или неправилно транспортни биоматериал нуклеинови киселини могат да разграждат, което води до фалшиви отрицателни на резултати хепарин може да инхибира реакцията PCR, така кръвни проби не трябва да се извършват в епруветки, съдържащи антикоагулант).
• Замърсяване на пробите чужд биологичен материал.
• Нарушаването на принципите на зониране лаборатория за молекулярно-генетични изследвания.
• Отказ за изучаване на отрицателната контрола.
• Отказът да се извърши повторен анализ на положителни проби.
• Липса на техники за изолиране на ДНК.
• Специфичността и чувствителността на PCR праймери същество зависи от структурата, така че използването на праймери от различни производители могат да предизвикат различни резултати.

Други аналитични PCR Technology Различни изпълнения се считат надеждни лабораторни процедури могат да осигурят висока чувствителност, специфичност и възпроизводимост. Въпреки наличието на технически възможности за идентифициране на повишени нива на протромбина, диагностика на тромбофилия трябва да се основава изключително на използването на PCR варианти.