Endocrinology протеолитични ензими ефект върху метаболитната активност на мозъчните клетки и неутрофилни левкоцити плъхове албиноси

Известно е, че протеолитични ензими (трипсин, химотрипсин и други) в някои случаи имат изразен protivovospalitelnoedeystvie. В тази връзка, относително протеазни ензими shirokoispolzuyutsya за лечение на различни възпалителни заболявания групи: бронхо-белодробна, гинекологични, стоматологично, opuholevyhprotsessov (2,7,14), както и за предотвратяване на възпаление в операция (6). Междувременно механизми възпалителни процеси профилактично и терапевтично deystviyaproteoliticheskih fermentv ostayutsyanedostatochno изследвани. Най напълно осветена и ролята на литература argumentirovanav некроза и фибринолитична (тромболитична) ефект на протеази в техния противовъзпалителен ефект (5,6). Въпреки това, литературата е малко доказателства за пряка последица от протеази на metabolicheskuyuaktivnost клетки.

Работата е насочена експериментален issledovanievliyaniya трипсин и каликреин на aerobnogookisleniya ензимна активност в нервните клетки и макрофагите играят водеща предотвратяване Rolv на възпаление (gematoentsefalicheskiybarer).

Материали и методи.

Експериментите се провеждат върху 61 бели плъхове мъжко население Vistarmassoy 200-250 грама Постигнати 10 серия от експерименти: 6 серия - контрол, който учи дехидрогеназна активност в система неутрофилите leykotsitahi "неврон струпване" mozgaintaktnyh кора на животни чрез интраперитонеално инжектиране на 0,85% натриев rastvorahloristogo инактивиран трипсин и каликреин (39krys) - Серия 4 - експериментален в която degidrogenazneyrotsitov активност проучен чрез интраперитонеално инжектиране на активен трипсин и каликреин, както и активността на дехидрогенази и съдържание на гликоген в neytrofilnyhleykotsitah плъхове чрез интраперитонеално инжектиране на aktivnyhfermentov за изпитване (24 животни). изпитваните лекарства се прилагат от rascheta50 микрограма на 100 грама тегло на животните. Изследване на метаболитен nervnyhkletok кора неутрофилни левкоцити osuschestvlyalispustya плъхове 6 часа след интраперитонеално приложение на експериментите тест preparatov.Rezultaty са показани в Таблици N1 и N2.

Когато хистохимично изследване обект izucheniyasluzhil раздел мозък на плъх, взети в левия peredneytsentralnoy гирус. За хистохимичен анализ се получават kriostatnyesrezy 15 микрона дебелина при -20^оС mikrotome- kriostateMK-25 от обичайния метод [9]. mozgakrys мозъчната кора клетки лактат дехидрогеназа активност се открива, процедурата glitserofosfatdegidrogenazypo Hess, Scarpelli, Pierce [9] и suktsinatdegidrogenazypo процедура Nahlasa [8]. Активността на дехидрогенази съди pokontsentratsii формазан гранули в точки на обектите. Kontrolspetsifichnosti degidrogenazprovodili хистохимично откриване на активност на криостатни срезове от мозъчна тъкан, която inkubirovaliv работни разтвори в отсъствието на специфични substratovokisleniya него. Отчитане хистохимично реакция използва дехидрогеназа osuschestvlyalis cytophotometry при дължина на вълната 512 нм, zonda0,1 см диаметър, леща 40 [1]. Оценка на чисто химически реакции otsenivaliv абсорбционни единици. При определяне на активността на неутрофилни гранулоцити degidrogenazv кръвни бели плъхове проучени aktivnostSDG [15], LDH и за метод TPD Hess и сътр. [8] модификация предложен Борисова MA и др. [3,4]. Цитохимични vyyavlenieglikogena в неутрофилни левкоцити се извършва по метода на Хочкис-Shabadash [11,13]. Окончателна оценка цитохимични реакция osuschestvlyalipo принцип Kaplow L. [14]. Левкоцитите в zavisimostiot степен на ензимната активност се класифицират:
1 степен - в цитоплазмата на отделни гранули, съдържащи formazana.Aktivnost ензим незначително (Фигура 1а).
2 степен - формазанова гранули заемат по-малко от половината tsitoplazmykletok. Тази група включва клетки, съдържащи малки (прахове) включва или много бледо оцветено дифузно маса (1б).
3 степен - изразява включвания левкоцити с реакционните продукти, които заемат повече от половината от цитоплазмата на неутрофили (1С).
4 степен - изразени клетки с включвания реакционни продукти заемат цялата цитоплазмата на левкоцитите на неутрофилите. Aktivnostfermenta висока (ris.1g). Резултатите от научните изследвания статистика obrabatyvalimetodami колебания.

Резултати и обсъждане.

Интраперитонеално инжектиране на плъховете причинява увеличаване на трипсин ilikallikreina в neurocytes и клетки neyrogliibolshih мозъчни полукълба ензимна активност aerobnogookisleniya - LDH 27.2% (р < 0,001), на 18,2% (р < 0,002)соответственно. Активность ЛДГ в изучаемых клетках больших полушарийголовного мозга под действием трипсина и калликреина снизиласьна 27,8% (p < 0,025) и на 16,3 (р < 0,001) соответственно.Активность ГФД в нейроцитах и клетках нейроглии больших полушарийголовного мозга снизилась на 26,0% (р < 0,01) только под действиемтрипсина. Введение калликреина также вызвало уменьшение данногоцитохимического показателя на 5,3% (р < 0,05).

Резултатите от изследването са представени в таблица obobschenyi. N1.
Ефект на трипсин и каликреин на дехидрогеназна активност, невроглия sistemeneyrotsit мозъчната кора на плъхове ин виво (М +/- т).

Забележка: в числителя - Дейност degidrogenazv условни обичайните единици в знаменателя - промяната в индекса по отношение на контрола protsentahpo. За серия от експерименти N3,4 - контрол yavlyaetsyaseriya N2. Серия М5- серия N3. За серия от N6 - N4 серия. (*) - р < 0,05- (**) - р < 0,025- (***) - р < 0,01- (****)- р < 0,002- (*****) - р < 0,01.

Данните Сравнение на хистохимично issledovaniyameta параболичен активност на мозъчните клетки и кръвни belyhkrys изследва действието на протеази идентифицирани същите показатели napravlennostizuchaemyh. Парентералното приложение tripsinai каликреин животни в доза от 50 мг на 100 г телесно тегло, причинена suschestvennyysdvig система метаболизъм и неврон-невроглия и кора golovnogomozga и неутрофили към повишен аеробно окисление vosstanovitelnyhprotsessov, както ясно се вижда от повишаването aktivnostiSDG, ключов ензим в окислително фосфорилиране. Uchityvayapryamoe kininogenaznoe действие кръв трипсин и каликреин [12], може да се предположи, че ние сме идентифицирали цитохимични izmeneniyav клетки от кората на мозъчните полукълба на obuslovlenybiologicheskim действие плъх на кинини, което вероятно pronikayutcherez кръвно-мозъчната бариера и да се стимулира в процесите на невронни tkaniaerobnye редокс.

Намалена активност на LDH, ключов ензим aerobnogookislitelnogo ензим в клетките на мозъка и кръвта belyhkrys на под действието на трипсин предполага, че този fermentpri парентерално приложение инхибира гликолиза в клетки със специфичност razlichnoyfunktsionalnoy.

Известно е, че в сравнение с най-drugihkletok тяло във всички левкоцити гликолитната prevraschenieuglevodov надделява над окислително фосфорилиране. Udelnyyves гликолиза е повече от 60% от общия energeticheskihprotsessov [10].

Таблица 2.
Промени дехидрогеназна активност и съдържание на гликоген в neytrofilnyhleykotsitah бели плъхове под действието на трипсин и каликреин (М +/- m) - (в единици за активност Kaplow)

Забележка: във всяка серия issledovaniyi използва в контрола на 6 животни. Значимостта на различията: р < 0,001.

1. Парентералното приложение на ниски дози от трипсин horoshoizuchennymi заедно с терапевтични свойства, инхибира анаеробни energeticheskiyobmen неутрофили инхибират левкоцитната миграция процес ochagvospaleniya и по този начин предотвратява разпространението vospalitelnogoprotsessa.
2. Ефект на малки дози от трипсин увеличава antitripticheskuyu aktivnostgomogenata мозъчните полукълба на плъх и има vyrazhennyylechebny противовъзпалителен ефект.
3. Малки дози каликреин, като ниски дози трипсин snizhayutaktivnost LDH и TPD в неутрофилите и левкоцитите мозъчен хомогенат stimuliruyutantitripsinoliticheskuyu mozgakrys активност, която позволява на каликреин в малки дози, както и трипсин, използван като противовъзпалително средство.

Позоваването

1. Agroskin LS Papayan GV Cytophotometry: оборудване и metodyanaliza на поглъщане на светлината клетки. - Ленинград. Наука, 1979.- 259 с.
2. Baumhakl U. S. Fodemar, Kreychova H. ензим ostryhi хронични възпалителни процеси в книгата: системен ензим терапия: изследвания и клиничната практика. Променено K.Nouza, ZA. Masinovsky, R. Nouza. - Мюнхен. - Прага. - 1994 - S. 27-30.
3. Борисова MA, Ovcharenko NI, минерални извори AS Някои supravitalnyesposoby цитохимични определяне на активността на сукцинат дехидрогеназа laktatdegidrogenazyi кръвни клетки // Lab. бизнес. - 1975.- N 12. - S. 723-725.
4. Борисова MA, Ovcharenko NI Shpak SI, и др. Supravitalnyesposoby цитохимични определяне на активността на алфа-glitserofosfatdegidrogenazyi глюкозо-6-фосфат дехидрогеназа в левкоцити perifericheskoykrovi // Lab. бизнес. - 1983 - N 9. - стр 8-10.
5. VF Veselov, VA Протсенко Ефект на протеолитични ензими uux инхибитори на навлизането на кислород мозъчна тъкан на плъхове и eeantitripticheskuyu активност // Ukr. Biochem. Zh. - 1981 -N 4. - стр 106-108.
6. Wolf, М., К. Лечението Ransberg ензими. - Москва: Мир, 1976.- 233 с.
7. Dittmar DF Аднексит в книгата: Системната ензим терапия: проучвания-niyai клиничната практика. Редактирано от К. Nouza, ZA. Masinovsky, P. Nouza. - Мюнхен. - Прага. - 1994 - S. 35-36.
8. E. Pierce Хистохимично теоретична и приложна. Москва: Inostr.liter, 1962.- 962 стр ..
9. Фьодоров NA Нормално хемопоеза и нейното регулиране. - Москва: Medicine, 1976 - 543 стр.
10. Shabadash AL Цитологични и цитохимични механизми predstavleniyao бариера в клетките. Дейност на срещата в книгата: хистопрогностиччна gematicheskiebarery. - Москва: Наука, 1961 г. - П. 381-394.
11. Hamberg U. Влияния върху системата на кинин чрез протеолиза inplasma // Proc. Рой. Sol. - Лондон, 1969 - В. 173. - П. 393-406 N 1032.-.
12. Хочкис R.D. А microchemical реакция resalting в staimingof полизахаридни структури във фиксирани yissue препарати // Arch. Biochem. - 1948 г. - V.16. - стр 131-141.
13. Kaplow L. A хистохимично процедура за локализиране на evacuatingleucocyte алкални phasphatase активност в намазки кръв мозък // кръв. - 1955 г. - V.10. - П. 1023-1029.
14. Klashka Е. Устни enzimes - нов подход към cfncer tritment // форум. - Мед. - Verl. - Ges. - 1996 -V.2.- R. 102.
15. Quglino D., Hayhol Е. Ацетон фиксиране за cytochemicaldemonstration на dehidrogenase в кръвта и костния мозък ctlls // Nature.- 1960 -V.1.- P. 85-86.
16. Соколова A. Behandlung де multiplen myeloms MIT enzimen // Wzarba Y., Klein M.-W., Miehlke и сътр. (Eds.). Sistemischeenzymtherapie. Aktueller стоя и Fortschritte. - MMW MedizinVerlag. - Мюнхен. - Германия. - 1996 година.